关于盐酸二甲双胍中遗传毒性物质NDMA检测方案（气质、液质）

1. 概述

遗传毒性是指遗传物质中任何有害变化引起的毒性，而不参考诱发该变化的机制，又称为基因毒性。遗传毒性杂质是指能引起遗传毒性的杂质，包括致突变型杂质和其他类型的无致突变性杂质。致突变型杂质指在较低水平时也有可能直接引起DNA损伤，导致NDA突变，从而可能引发癌症的遗传毒性杂质。目前遗传毒性列表中有1574种致癌物质，亚硝胺类、磺酸酯类和苯并芘类等属于高遗传毒性物质。由于遗传毒性杂质在低暴露水平时就可能导致严重的毒性，存在重大的安全风险，所以评估和控制药品中的遗传毒性杂质是保障药品质量和安全的重点。

2. NDMA的基本信息

N- 二甲基亚硝胺又称二甲基亚硝基胺，缩写为 NDMA，黄色液体，可溶于水、乙醇、乙醚、二氯甲烷，属于亚硝胺类化合物。NDMA的合成通常由二甲胺与亚硝酸盐在酸性条件下反应生成。NDMA在环境、工业产品、烟草及腌制食品等中广泛存在，常用作溶剂、有机合成中间体等。分子式为C2H6N2O，分子量74.08。根据欧盟发布的《Development of structure alerts for the in vivo micronucleus assay in rodents》中的相关信息，可知 NDMA 的结构式中含有烷基亚硝酸盐的遗传毒性警示结构。此外，有文献报道，在已检测的 300 种亚硝胺类化合物中，已证实有 90% 至少可诱导一种动物致癌，其中乙基亚硝胺、二乙基亚硝胺和二甲基亚硝胺至少对 20 种动物具有致癌活性。根据 ICH M7 通则对基因毒性杂质的分类原则，NDMA 应属于第一类已知诱变性和致癌性的物质。在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中 NDMA 被列为 2A 类致癌物。

3. NDMA杂质的来源及控制限度

是遗传毒性杂质主要来源于原料药合成过程中的起始物料、中间体、试剂和反应副产物。此外，药物在合成、储存或者制剂生产过程中也可能会降解产生遗传毒性杂质。药物中 NDMA 的可能来源包含以下方面：

1. 硝酸环境下与体系中的二甲胺发生反应得到

2. 药物本身发生降解产生二甲胺，然后继续与硝酸盐反应得到

3. 生产工艺过程中使用了二甲胺前体试剂，由其发生降解得到

4. 药物含有二甲胺或者类似结构，通过氯胺化或者氧化等途径降解产生 NDMA，如雷尼替丁、二甲双胍等

5.  药物合成过程中使用了叠氮试剂或亚硝酸盐，在有二甲胺供体的情况下反应生成 NDMA，如四氮唑类

药物缬沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦等

6. 其他途径引入，如制药用水、辅料等

参考 ICH M7 通则对遗传毒性杂质的分类原则，NDMA 应属于第一类已知具有基因毒性和致癌性的物质，其控制不高于化合物可接受限度（AI）。根据 WHO 的数据，NDMA 的 AI 值为 0.005~0.016 μg/kg，换算后为 0.375~1.2 μg/ 天。但对于缬沙坦等患者需要长期服用的药物来说，对其中的遗传毒性杂质的控制要求则更为严格。“缬沙坦事件”后，中国药品监督管理局在官网上公示了国家药典委《关于缬沙坦国家标准修订稿》，增订了缬沙坦生产要求，规定了 NDMA 的限度不得过千万分之三（相当于 EMA 的暂定参考限定值 0.3ppm）。“缬沙坦事件”持续发酵后，2018 年 12 月，FDA 发布了血管紧张素 II 受体拮抗剂（ARB）中亚硝胺杂质的临时可接受摄入水平供生产商用以确保其制剂产品对患者是安全的。从 FDA 发布的 ARB 药物中NDMA 和 NDEA 临时限度列表可知，NDMA 的可接受摄入量为 96 ng/ 天。根据各 ARB 的最大日剂量，则可计算 NDMA 的可接受摄入含量。如缬沙坦以最大日剂量 320 mg 计，NDMA 的可接受含量为 0.3 ppm，与中国及 EMA 要求的限度相同。对于雷尼替丁，FDA 在公告信中提到，建议公司如检测发现 NDMA 超出可接受日摄入水平（雷尼替丁 96 ng/ 天或 0.32 ppm）则应召回其产品。同样地，在 FDA 的公告信中也提到二甲双胍中NDMA 的可接受日摄入水平为 96 ng/ 天，根据该值及最大日剂量则可计算出二甲双胍药品中 NDMA 的限度控制水平。如盐酸二甲双胍片最大日剂量为 2 g，则该产品中 NDMA 的可接受摄入水平是 0.048 ppm。

4. NDMA杂质的检测方法

药品中遗传毒性杂质 NDMA 的含量极微，控制限度比较低，对检测方法灵敏度提出了很高的要求。目前中国药典委员会、美国 FDA、欧洲药典委员会 EDQM 及加拿大卫生部等机构公布的 NDMA 检测方法主要有 GCMS、GC-MS/MS、LC、LC-HRMS、LC-MS/MS 法等

我司针对盐酸二甲双胍原料及制剂中NDMA含量检验进行方法开发，包括气质、液质2种方法。盐酸二甲双胍片、肠溶片、缓释片及原料资料参考结果如下：